Полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР) на інфекції, що передаються статевим шляхом (ІПСШ) в Києві

Полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР) — це один із найточніших та найшвидших способів діагностики інфекційних захворювань, що передаються статевим шляхом. Вона широко застосовується у різних галузях медицини, включаючи урологію, гінекологію, неонатологію та службу переливання крові.

ПЛР був винайдений американським біохіміком Кері Маллінсом у 1986 році. За цей винахід Маллінс отримав Нобелівську премію з хімії в 1993 році.

Понад 30 видів бактерій, вірусів та найпростіших можуть передаватися через статевий контакт, включаючи вагінальний, оральний та анальний секс. Ці збудники об'єднані в категорію "інфекції, що передаються статевим шляхом" (ІПСШ). Найпоширеніші серед них — сифіліс, гонорея, хламідіоз, трихомоніаз, вірус простого герпесу, а також інші віруси.

Деякі інфекції також можуть передаватися іншими шляхами, наприклад, через кров або від молока матері-годувальниці до дитини.

Ознаки інфекцій, що передаються статевим шляхом (ІПСШ)

Симптоми інфекцій можуть проявлятися у вигляді виділень з піхви або уретри, відчуття печії під час сечовипускання, виразок на статевих органах та болю в області живота.

Однак деякі ІПСШ можуть протікати безсимптомно, що ускладнює своєчасну діагностику та лікування. Це може призвести до ускладнень та продовження поширення захворювань.

Серйозні наслідки інфекцій включають:

• Передачу захворювання від матері до дитини, що може призвести до викидня, передчасних пологів, низької ваги новонародженого, сепсису, пневмонії, кон'юнктивіту та вроджених аномалій.
• Безпліддя.
• Близько 14 штамів вірусу папіломи людини (ВПЛ) є онкогенними та можуть викликати рак шийки матки, особливо ВПЛ типів 16 та 18.

Важливо відзначити, що багато ІПСШ, такі як сифіліс, хламідіоз, трихомоніаз та гонорея, повністю виліковуються. У разі вірусних інфекцій, таких як ВПЛ та ВІЛ, терапія може значно полегшити симптоми та покращити якість життя пацієнта.

Що таке полімеразна ланцюгова реакція?

Полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР) — це метод, заснований на багаторазовому збільшенні числа копій певної ділянки ДНК або РНК. Цей процес називається спрямованою ампліфікацією, і його ефективність досягається завдяки значному збільшенні кількості копій специфічної нуклеотидної послідовності в зразку в 10^6-10^8 разів. Це забезпечує високу чутливість методу.

Для проведення ПЛР необхідні:

• Фермент ДНК-полімераза, отриманий з термофільних бактерій і стійкий до високих температур.
• Праймери, які служать початковою точкою для синтезу нових ланцюгів ДНК.
• Нуклеотиди, які є будівельними блоками ДНК.
• Буферний розчин.
• Прилад, який забезпечує потрібну температуру для реакції.

Метод складається з таких етапів:

• Денатурація, коли дволанцюгова ДНК нагрівається до 94-96°C, що призводить до розділення ланцюгів.
• Відпал праймерів, коли температура знижується, дозволяючи праймерам зв'язуватися з розділеними ланцюгами ДНК.
• Елонгація - ДНК-полімераза починає подвоювати ДНК, використовуючи праймери як стартові точки.

Якщо віруси містять генетичний матеріал у вигляді РНК, використовують ПЛР зі зворотною транскрипцією. Перед стандартною ПЛР молекула РНК за допомогою ферменту зворотної транскриптази перетворюється на комплементарну ДНК, яку потім можна ампліфікувати стандартним методом.

Діагностика методом ПЦР

Діагностика методом полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) включає кілька етапів:

1. Забір матеріалу. Матеріал для дослідження може бути взятий з різних джерел залежно від виду інфекції або захворювання. Наприклад, зразки крові, мазок з уретри або піхви, слина чи інші зразки тканин.
2. Транспортування та зберігання матеріалу. Зібраний матеріал необхідно доставити до лабораторії для подальшого дослідження. Під час транспортування матеріал можна зберігати при кімнатній температурі до двох годин або в холодильнику при температурі 2-8°C до 24 годин.
3. Виділення ДНК з матеріалу. У лабораторії з зібраного зразка виділяють ДНК для подальшого аналізу.
4. Ампліфікація ДНК. Для збільшення кількості копій специфічної ДНК з матеріалу використовують ампліфікаційні суміші та проводять процес у термостаті, який підтримує потрібну температуру для реакції. Процес ампліфікації триває близько 2-3 годин.
5. Інтерпретація результатів. Після завершення ампліфікації результати аналізують за допомогою електрофорезу, при якому використовується бромистий етидій, сполука, що зв’язується з ДНК та створює світіння при освітленні ультрафіолетовим світлом. Наявність світних ділянок свідчить про позитивний результат.
6. Кількісна ПЛР. У деяких випадках лікар може призначити кількісну ПЛР, щоб оцінити ступінь активності процесу. Так лікар зможе оцінити кількість патогенів у зразку та призначити правильне лікування.

Таким чином, метод ПЛР забезпечує високу чутливість і точність у діагностиці інфекцій, що передаються статевим шляхом, та інших захворювань.

Метод полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) має як переваги, так і недоліки

Переваги:

• ПЛР дозволяє виявити навіть невеликі кількості ДНК або РНК патогенних організмів, що робить його особливо корисним у діагностиці інфекційних захворювань на ранніх стадіях.
• Метод дозволяє виявити унікальні генетичні послідовності, характерні лише для певних видів збудників, виключаючи перехресні реакції.
• Час проведення аналізу відносно короткий — близько кількох годин, що дозволяє швидко отримати діагностичну інформацію.
• ПЛР можна проводити з використанням різних типів зразків, включаючи кров, сечу, мазки, змиви, зіскоби та інші.

Недоліки:

• Ампліфікація ДНК загиблого мікроорганізму. ПЛР може виявляти ДНК або РНК мертвих мікроорганізмів. Тому для контролю ефективності лікування тестування слід проводити через 1-2 місяці після закінчення терапії, щоб переконатися в повній елімінації збудників.
• Змінюваність та мутація мікроорганізмів. Швидка мутація деяких мікроорганізмів може знизити ефективність ПЛР, якщо зміни торкнуться послідовностей, що використовуються в діагностиці.

Попри деякі недоліки, ПЛР залишається одним із найбільш ефективних та точних методів діагностики та відіграє важливу роль у медицині завдяки своїй чутливості, специфічності та швидкості отримання результатів.

Записатися на прийом